上海市微生物学会

2024年9月20日下午，由同济大学附属上海市肺科医院检验科、上海市微生物学会临床微生物专委会共同主办的“2024年叶园感染性疾病实验诊断论坛系列学术活动”在上海檀程大酒店顺利召开。本次论坛采用线上直播及线下会议同步进行，来自全国各位的180余位医学同道参加了该论坛，同时线上直播累计观看人数为17189人，高峰时段达9552人同时在线观看。

开幕式由同济大学附属上海市肺科医院检验科主任余方友教授主持，同济大学附属上海市肺科医院院长艾开兴教授、上海市微生物学会常务理事倪语星教授和上海市临床检验中心主任胡晓波教授分别致辞。余方友教授首先感谢了各位同道对本次论坛的大力支持，并向大家介绍了当日莅临会场的专家学者们。艾开兴院长代表同济大学附属上海市肺科医院对各位专家及学员的到来表示诚挚的欢迎，也对余方友主任带领下的检验科在医、教、研等方面取得的成绩表示了肯定，并预祝本次论坛取得圆满成功。倪语星教授作为老一辈微生物检验领域的专家，在致辞中强调了实验室诊断对感染性疾病的重要性，并感谢本次论坛为医务工作者提供了相互学习交流的高水平平台。胡晓波教授在致辞中指出实验诊断技术的发展日新月异，医务工作者必须注重感染性疾病诊断的先进性和规范性，更好的为患者服务。

本次会议大咖云集，首先应斌武教授介绍了结核分枝杆菌（Mtb）是人类结核病的主要病原体，已进化出多种途径逃避宿主免疫并诱导强烈的炎症反应和广泛的组织传播。随后应教授深入讲解了Mtb感染过程中细胞凋亡、细胞自噬、细胞焦亡、铁死亡及细胞坏死的研究进展，深入解析不同细胞死亡模式在宿主与Mtb互作的分子机制，对于我们进一步理解结核病发病和Mtb免疫逃逸机制以及挖掘新诊断标志物具有重要意义，有助于为结核病治疗提供新的视角和策略。接着曹炬教授分享了一例脓毒症患者的病例，继而引出我们检验医学能为拯救脓毒症患者所采取的措施。曹炬教授的研究团队发现，AIM/CD5L可以作为脓毒症患者死亡风险的预警标志物。此外，曹炬教授证实了BMP9通过促进巨噬细胞募集、吞噬和细菌杀伤发挥对抗感染作用。因此BMP9可以作为脓毒症新型生物标志物和宿主导向治疗靶标。曹炬教授及其团队的研究为开展基于生物标志物的脓毒症精准治疗提供了理论依据和免疫诊治靶点。余方友教授指出非结核分枝杆菌（NTM）感染有增加的趋势，但要注意排除实验室污染及定植。其次，NTM菌种繁多，鉴定到种困难，常需检测多个分子靶标，质谱技术可帮助快速鉴定NTM菌种，上海市肺科医院检验科利用飞行时间质谱技术对分枝杆菌进行菌种鉴定具有良好的效果。余教授还提到商品化的分子生物学技术可直接对临床标本进行检测。并且近期备受关注的宏基因组二代测序技术（mNGS）通过直接测定样本中的DNA/RNA即可实现病原菌的鉴定及分型。褚海青教授介绍了非结核分枝杆菌NTM的定义和危害性，支扩合并NTM发生率高，呈上升趋势，最常见的菌种为鸟分枝杆菌（MAC）和脓肿分枝杆菌（MAB）复合群。然后阐述了支气管扩张NTM的诊断标准，三种情况下需要考虑支扩患者合并了NTM感染。随后她详细讲解了NTM的治疗原则和治疗选择，包括鸟分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌和脓肿分枝杆菌复合群的治疗，以及NTM的综合治疗。最后她通过一系列病例，向大家分享了NTM治疗方面的新进展。赵雁林教授从NTM的全球流行情况切入，详细介绍了NTM感染现状和存在的问题。NTM方面的基础研究还不太成熟，比如耐药机制、毒力和致病性方面尚未完全清楚。NTM体外药敏试验与临床治疗效果的对应关系差，基于药敏试验的临床治疗受到制约。因此NTM的流行与抗感染治疗是一个复杂的公共卫生问题，仍需要多方面的共同努力。黄金伟教授分享了一个颈部淋巴结肿大患者的详细病史，从出现症状，到数次住院，从肿瘤到鸟胞内分枝杆菌感染的诊断治疗。治疗后还是反复发病，最后确诊为马尼菲篮状菌混合NTM的感染。值得注意的是，黄金伟教授总结出了诊断感染性疾病的五步思路，为类似病例的诊疗提供了重要指导。医生对患者的长期追踪与治疗方案的不断调整不仅展示出医者的耐心和敬业精神，更为患者带来了无尽的希望。杜鸿教授指出NGS是病原的高效诊断器，具有广、准、快的优势，其阳性检出率、灵敏度和特异性高于传统的培养法，并且在真菌、结核分枝杆菌及病毒感染中具有较高的诊断价值，因此被广泛应用于临床标本中微生物的鉴定。此外，杜鸿教授介绍了如何解读NGS报告，检出序列数、覆盖度、离散度、相对丰度、深度是NGS报告的五大参数，但NGS也存在假阴性的情况。徐金富教授强调铜绿假单胞菌是下呼吸道感染的重要病原体，在CAP和HP中分离率高，在我国医院获得性肺炎的病原谱中，铜绿假单胞菌占16.9%至22.0%，位列第2位。在我国社区获得性肺炎的流行病学调查结果中，铜绿假单胞菌的分离率约为1.0%，但在重症社区获得性肺炎的病菌分离率中，铜绿假单胞菌的分离率更高，约为1.8%至8.3%。PA药敏检测及耐药机制检测对指导临床治疗有重要意义，但是体外药敏不能完全代表体内情况，应该根据药敏合理选择治疗方案，必要时联合治疗。胡龙华教授介绍了二氧化碳嗜纤维菌、类鼻疽霍尔德、布鲁菌等细菌的临床特征与相关病例。如类鼻疽霍尔德是一种革兰阴性，双极浓染明显的细菌，主要表现为荷包蛋样菌落，培养三天以上可产生特殊的泥土味，毒力强，发病凶险，病死率高。柯氏染色法是鉴定布鲁氏菌的经典染色方法之一，染色后的布鲁氏菌呈红色球杆状，常用于对布鲁氏菌的初步鉴定。王国庆教授强调了防治长新冠患者的重要性，介绍了多维整合组学技术的定义和应用，并指出了单细胞测序、转录组测序的局限性，由此引出QUBIC双聚类分析技术。围绕“通过整合传统分子生物学及现代计算生物学技术进行高通量数据分析，实现新冠病毒分子流行病学、溯源，功能可视化及致病因子网络调控，明确新冠病毒感染机制，构建预警平台”等研究内容进行了介绍，深入浅出的阐述了整合生物组学在新冠病毒研究及相关药物的研发中的应用。罗阳教授介绍了体外诊断技术的发展现状。体外诊断技术在疾病诊断过程中起到了重要的桥梁作用，现有大型体外诊断技术设备已逐步实现集成化、智能化，而便携式的现场快速设备是未来发展的方向。随后，他介绍了主动健康与检验医学新模式，具体讲述了现场快速检测技术在蛋白分子、核酸分子、囊泡等快速超敏检测中的发展趋势。此外，罗阳教授指出，智能化、精度化的可穿戴技术是未来快速现场检测的发展方向。张嵘教授指出细菌不是单独存在的，可以在人、动物、环境形成统一的整体，同时，细菌耐药性广为存在，整体研究相当重要。张教授从多个耐药基因切入，为我们展示了健康人群中多黏菌素耐药的流行变迁。接着，她详细介绍了临床中主要的耐药菌以及它们各自的耐药情况及流行特征，提醒大家做好耐药菌的防控任重道远。黄晓颖教授强调结核分枝杆菌引起的结核病在全球范围内依然是重大公共卫生问题。耐药结核，尤其是多药耐药结核（MDR-TB）和广泛耐药结核（XDR-TB），使得治疗变得更加复杂和昂贵，且患者预后较差。因此，开发快速、准确、便捷的耐药结核检测方法具有重要意义。基于CRISPR技术的耐药结核检测方法，有着高特异性、高灵敏度和快速便捷的优势，有望显著提升耐药结核的诊断水平，促进早期治疗和控制耐药结核的传播。王明贵教授首先强调碳青霉烯类耐药肠杆菌（CRE）感染是一个日益严重的全球公共卫生问题，其中碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌（CRO）是最常见和最具威胁的一类。近年来，诊断方面，分子生物学技术如实时聚合酶链反应（qPCR）和全基因组测序（WGS）提升了检测速度和准确性；质谱技术（MALDI-TOF MS）和微流控芯片实现了快速鉴定和多重基因检测；纳米传感器的发展则提供了灵敏的现场检测手段。治疗方面，新型抗生素如头孢唑肟/阿维巴坦和美罗培南-伐博巴坦对多种CRO表现出良好疗效，抗生素组合疗法通过联合使用不同机制的药物，提高了疗效并减少耐药性。此外，噬菌体疗法、免疫治疗和抗菌肽等非抗生素治疗策略也在临床试验中展现出潜力。田国宝教授首先指出抗生素耐药性是人类面对的严峻挑战，既是重大临床问题也是重要的生物安全问题。其次，田教授从微生物对抗生素的耐药性等重要临床问题出发，基于发现质粒介导的多粘菌素耐药新基因MCR-1，阐明了MCR-1的来源与传播机制、耐药机制、未来进化方向和交叉耐药机制。余方友教授以容易混淆的抗生素、抗菌药物和抗微生物药物概念以及相互之间的区别和联系为背景，引出了抗菌药物发现时间、作用机制和细菌耐药机制，再进一步介绍耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA的发展史和抗菌药物耐药性现状，并指出需尽快了解细菌的耐药性，针对性地给予抗菌药物治疗，而开发和掌握快速高效的药敏试验检测方法就是关键。马筱玲教授指出作为临床检验医生，我们面对日益更新的技术和不断变化的临床病原体，需要不断学习新知识并提升临床能力。WHO于2024年5月28日将细菌优先级病原体清单更新，更新的清单排名反映了对“社区”病原体的认识显著增加。世界卫生组织（World Health Organization，WHO）在《终结结核病战略》中呼吁早期诊断结核病并普及药敏试验（DST），强调了实验室在快速准确检测结核病和耐药性方面的关键作用并更新《结核病整合指南：模块3，诊断-结核病的快速诊断》。CLSI药敏试验标准M100于2024年2月更新。这些新指南新行规需要我们去认真学习并落实到日常的疾病诊疗当中去，以更好地服务病患和消灭疾病。徐锦教授为我们带来了一个系统全面的儿童呼吸道腺病毒感染方面的讲座，包括腺病毒的分型、致病性、结构到腺病毒毒力蛋白、基因和基因型划分再到流行病学特征和该病毒引起的感染暴发流行等内容。腺病毒感染性较强，常引起暴发流行，且病情较重时可引起死亡。不同型别的腺病毒基因重组现象多见，容易产生多种新型别，增强免疫逃避，应加强监控。抗原检测加核酸检测适用于腺病毒的病原学诊断，而腺病毒POCT核酸检测适合门急诊快速筛查。王辉教授首先指出临床重要泛耐药菌严重威胁人类健康，特别是高毒力且碳青霉烯耐药的肺炎克雷伯菌具有隐匿性，值得注意。王辉教授团队团队发现产KPC酶仍是中国CRKP的主要耐药机制，且blaKPC在质粒之间频繁转移，有向泛耐药发展的趋势，此外blaKPC的全球传播也具有地理局限性。他们通过开展高毒力肺炎克雷伯菌的多中心监测，发现ST11-KL64 CRKP是新的优势亚克隆，并主要在2010年前后传入中国，而ST11-KL64 CRKP的宿主-质粒共进化有利于菌株存活；此外，他们也发现染色体携带毒力基因可使ST11-KL47 CR-hvKP的毒力基因稳定遗传。他们致力基于mNGS数据对耐药菌或致病菌的快速溯源，并构建了可视化网站，强调未来我们应该着力建立贯通“医院-社区-养殖”全链条监测和预警体系。欧阳松应教授团队主要从致病菌入侵宿主促进增殖和致病菌自我免疫抗入侵两方面展开研究，将嗜肺军团菌作为研究模式菌，揭示了一种新型泛素化修饰酶MavC及其去泛素化修饰MvcA调控宿主天然免疫防御功能机制；另外一个工作发现SidJ通过对SdeA进行谷氨酸化修饰，从而负调控其功能。基于目前在致病菌效应蛋白功能机制领域已取得的研究成果，欧阳教授特别指出致病菌感染机制研究和CRISPR-Cas系统效应蛋白功能机制研究，为靶向抗致病菌感染新策略提供了更多思路。张文宏教授以分枝杆菌病诊断技术与临床需求：进展与趋势为题讲授了临床分枝杆菌病的精准诊疗策略。张文宏教授提出分技杆菌病在临床上不容忽视，诊治仍存在难题。在临床治疗过程中，菌种鉴定和药敏检测可为临床精准诊治提供重要信息。结核病的精准诊治基于方案的精准、疗程的精准和剂量的精准。而非结核分枝杆菌病的治疗需制定个体化方案，并且需要注意进行不良反应的监测。宿主免疫状态的评估也至关重要，可为分枝杆菌病精准防治提供重要基础。沙巍主任基于全球范围内NTM患病率显著上升，提示目前对NTM病的规范化诊治仍然是我们努力的方向。虽然NTM一般不会从动物传染给人以及人传人，但是由于NTM病患者可长期排菌，理论上也存在感染他人的可能。此外，沙巍教授也对NTM的检测提出了一定的规范化要求，目前主要利用对硝基苯甲酸钠培养基（PNB）的生化反应对NTM进行初步鉴定，分子检测技术如直接同源基因或序列比对、二代测序技术、间接同源基因或序列比对和MALDI-TOF等技术也逐渐应用在NTM检测中；同时，推荐大家能够开展对NTM的药敏检测，更好得精准服务于临床对NTM病的诊治。李敏教授以金葡菌入侵宿主关键毒力表型变异及调控为题，介绍了金黄色葡萄球菌作为临床重要条件致病菌的特点。金葡菌作为临床重要耐药菌，具有感染率高、病死率高、耐药性强和适应性强的特点。金葡菌外分泌毒素，特别是 PFTs 在感染入侵中发挥重要作用。从定植到感染的过程中，宿主微环境分子通过调控 PFTs 表达促进其对环境的适应。阐明相关具体调控机制可为开发以环境分子为目标的新型“抗毒力”诊疗策略提供依据。俞云松教授介绍了临床上难治性铜绿假单胞菌的流行病学调查、耐药机制和诊疗策略。耐药性PA存在多种耐药机制，其中，金属酶是全球PA主流碳青霉烯酶酶型。此外我国CRPA耐药机制研究显示，外膜孔蛋白OprD2缺失及表达量下降是主要耐药机制。在临床诊疗过程中，新型β-内酰胺类抗生素和酶抑制剂的复方制剂是首选，但是否采用联合用药目前没有定论。胡付品教授介绍了碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌的流行趋势，强调目前临床上耐药菌株检测率快速上升，居高不下，且耐药菌株感染所致病死率高。耐药菌株检测率升高的原因之一可能是KPC基因在治疗过程中发生突变，导致治疗失败。紧接着胡教授介绍了blaKPC基因突变的危险因素，与广谱抗菌药物的使用，尤其是头孢他啶-阿维巴坦有关，并对细菌耐药突变机制进行了详细介绍。吴文娟教授首先向我们展示，念珠菌、曲霉、毛霉等真菌感染发病率均呈增加趋势，且不同菌种感染患者病死率均较高，其中高发、高病死率的侵袭性肺部真菌感染病原体包括曲霉菌属、新型隐球菌及耶氏肺孢子菌等。紧接着吴教授指出不同侵袭性真菌病的诊断思路差异、不同检测方法的局限性等因素可影响患者预后，导致不同侵袭性真菌病患者病死率存在差异，强调应依据不同患者侵袭性真菌病的发病特点、依靠多元化检测手段帮助临床精准诊断，从而早期正确识别侵袭性真菌病患者、早期启动适当的抗真菌治疗、降低患者死亡风险。李一荣教授首先介绍了ISO15189与公立医院绩效考核的关系，提出可从“创新”、“质量”、“速度”、“沟通”四个维度增加公立医院的满意度。紧接着分析了当前临床微生物诊断技术的新进展，指出临床宏基因组学和分子POCT技术可帮助对微生物的快速诊断。最后，李教授总结道质量是基础、速度创效益，沟通是关键、创新求发展。胡必杰教授以传统检测技术不能完全满足当下抗感染的需求为切入点，引出当前快速发展的分子检测技术。传统微生物检验周期长、阳性率低，而分子检测技术可快速、准确检测到病原体。随着微生物分子检测技术精准性、稳定性、检测速度、结果解读、价格成本的进一步改善，感染病的诊疗模式必将引发大变革，减少抗微生物药物使用和耐药诱导，感染病的病死率大幅度降低可望成为现实。

至此，2024年叶园感染性疾病实验诊断论坛圆满落下帷幕。余方友教授在会议的最后做总结，感谢各位专家不辞万里带来的精彩报告，也感谢线上线下的各位同道对本次会议的大力支持。“闭幕屏看花若雨，幸会金秋，全是诗家语”，让我们共同期待下一次叶园感染论坛的召开。